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液相色譜儀6大檢測器及其適用范圍比較

作者:英納氏            發布時間:2022-08-02
 

液(ye)相色譜儀6大檢(jian)測(ce)(ce)器是什么?檢(jian)測(ce)(ce)器的(de)(de)作(zuo)用是將色譜柱流出物(wu)中(zhong)樣(yang)品組(zu)成和含量(liang)的(de)(de)變化(hua)轉化(hua)為(wei)可供(gong)檢(jian)測(ce)(ce)的(de)(de)信(xin)號,從而定性定量(liang)分(fen)(fen)析待(dai)測(ce)(ce)組(zu)分(fen)(fen)。需(xu)要掌(zhang)握不同檢(jian)測(ce)(ce)器的(de)(de)原理。液(ye)相色譜儀常用的(de)(de)檢(jian)測(ce)(ce)器包括紫(zi)外(wai)檢(jian)測(ce)(ce)器、熒光檢(jian)測(ce)(ce)器、示差折光檢(jian)測(ce)(ce)器、蒸(zheng)發光散射檢(jian)測(ce)(ce)器、化(hua)學發光檢(jian)測(ce)(ce)器、質譜檢(jian)測(ce)(ce)器等(deng)。

紫外檢測器(UVD)

  是目(mu)前液相(xiang)色譜(pu)中應用最廣泛的(de)(de)(de)檢測(ce)(ce)器。自然界(jie)中大(da)部(bu)分(fen)(fen)有(you)機物和部(bu)分(fen)(fen)無機物都具有(you)紫(zi)外吸(xi)收(shou)(shou)能力(li)(li),UV檢測(ce)(ce)器根據(ju)化合物對(dui)紫(zi)外光(guang)(guang)(guang)的(de)(de)(de)吸(xi)收(shou)(shou)能力(li)(li),通(tong)(tong)過二極管將(jiang)光(guang)(guang)(guang)信(xin)號轉變(bian)為電信(xin)號,從而進(jin)行分(fen)(fen)析。它(ta)有(you)兩(liang)個流(liu)通(tong)(tong)池(chi),一個作參比,一個作測(ce)(ce)量(liang)(liang)用,光(guang)(guang)(guang)源(yuan)發(fa)出(chu)的(de)(de)(de)紫(zi)外光(guang)(guang)(guang)照射(she)到流(liu)通(tong)(tong)池(chi)上,若兩(liang)流(liu)通(tong)(tong)池(chi)都通(tong)(tong)過純的(de)(de)(de)均勻溶劑(ji),則它(ta)們(men)在紫(zi)外波長下幾乎(hu)無吸(xi)收(shou)(shou),光(guang)(guang)(guang)電管上接受到的(de)(de)(de)輻射(she)強度相(xiang)等,無信(xin)號輸出(chu)。當(dang)組(zu)分(fen)(fen)進(jin)入測(ce)(ce)量(liang)(liang)池(chi)時(shi),吸(xi)收(shou)(shou)一定的(de)(de)(de)紫(zi)外光(guang)(guang)(guang),使兩(liang)光(guang)(guang)(guang)電管接受到的(de)(de)(de)輻射(she)強度不等,這(zhe)時(shi)有(you)信(xin)號輸出(chu),輸出(chu)信(xin)號大(da)小與(yu)組(zu)分(fen)(fen)濃度有(you)關。

  使用過(guo)紫(zi)外檢(jian)測(ce)器的(de)(de)人應(ying)該都會(hui)發現,很多標(biao)準方法中都是以254nm作為檢(jian)測(ce)波(bo)長(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)的(de)(de),那為什么是這個波(bo)長(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)呢?因為在液相(xiang)色譜檢(jian)測(ce)器的(de)(de)發展過(guo)程中使用最久的(de)(de)是低(di)壓汞(gong)燈(deng),而汞(gong)的(de)(de)最大發射波(bo)長(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)是253.7nm,也就(jiu)是說在254nm波(bo)長(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)下,燈(deng)能量最高,檢(jian)測(ce)靈敏度最好(hao)。但現階段,很多紫(zi)外檢(jian)測(ce)器采用的(de)(de)是氘燈(deng),這時候(hou)254nm的(de)(de)檢(jian)測(ce)波(bo)長(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)其(qi)(qi)實意義不大,氘燈(deng)的(de)(de)使用范(fan)圍一(yi)般(ban)是190-800nm,需要(yao)考慮化合(he)(he)物的(de)(de)最大吸(xi)收(shou)(shou)波(bo)長(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)并(bing)且避開流動(dong)相(xiang)的(de)(de)吸(xi)收(shou)(shou)干擾來選擇(ze)合(he)(he)適的(de)(de)檢(jian)測(ce)波(bo)長(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)。這就(jiu)限制了其(qi)(qi)流動(dong)相(xiang)的(de)(de)選擇(ze)范(fan)圍,一(yi)般(ban)檢(jian)測(ce)波(bo)長(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)要(yao)避開溶劑截(jie)止(zhi)波(bo)長(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)20nm以上(shang)。

  熒光(guang)檢測(ce)器(FLD)

  是目前液相色譜靈敏度(du)最(zui)高的檢(jian)測(ce)器,應用廣泛,選擇(ze)性(xing)強。適(shi)用于(yu)能(neng)激發(fa)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)的化合(he)物。很(hen)多與生(sheng)(sheng)命(ming)科(ke)學有關(guan)的物質,如氨基(ji)酸、胺類、維生(sheng)(sheng)素、甾族化合(he)物及某些(xie)代(dai)謝藥(yao)物都可(ke)以(yi)(yi)用熒(ying)(ying)光(guang)(guang)法檢(jian)測(ce)。熒(ying)(ying)光(guang)(guang)檢(jian)測(ce)器在生(sheng)(sheng)物樣品痕量分(fen)析(xi)中具有重要作用,尤(you)其在用熒(ying)(ying)光(guang)(guang)衍(yan)生(sheng)(sheng)后,可(ke)以(yi)(yi)檢(jian)測(ce)很(hen)微量的氨基(ji)酸和肽。在實驗過程(cheng)中需要嚴格脫(tuo)氣,因為系統中殘留(liu)的氧氣會引(yin)發(fa)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)淬滅反應,造成峰面積(ji)大幅下降甚至不(bu)出峰。

  示差折光檢測器(RID)

  是一種通(tong)用(yong)型檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)器,利用(yong)物(wu)質的(de)折(zhe)(zhe)光(guang)效應(ying),對所有(you)物(wu)質均有(you)響應(ying),只(zhi)要(yao)被測(ce)(ce)(ce)組分與(yu)洗脫液的(de)折(zhe)(zhe)光(guang)指(zhi)數有(you)差(cha)別就(jiu)可使用(yong)。生命科學中常(chang)遇到各類糖(tang)類化合物(wu)、脂肪烷烴等,沒有(you)紫(zi)外吸收,一般(ban)常(chang)用(yong)示(shi)差(cha)折(zhe)(zhe)光(guang)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)器。它的(de)通(tong)用(yong)性比(bi)UVD廣,但(dan)靈敏度(du)(du)要(yao)低,對溫度(du)(du)變(bian)化敏感,是所有(you)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)器中對溫度(du)(du)要(yao)求最高的(de)。另(ling)外,不(bu)(bu)同的(de)流動(dong)相比(bi)例,其密度(du)(du)或者折(zhe)(zhe)光(guang)系數不(bu)(bu)同,如果流動(dong)相比(bi)例發生改(gai)變(bian),則(ze)會引起基線的(de)持續變(bian)化,因此示(shi)差(cha)折(zhe)(zhe)光(guang)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)器只(zhi)能采(cai)用(yong)等度(du)(du)洗脫,不(bu)(bu)能采(cai)用(yong)梯(ti)度(du)(du)洗脫,這(zhe)也限制了它的(de)使用(yong)。

  蒸發光散射檢測器(ELSD)

  也是一種通用(yong)(yong)型的(de)檢(jian)(jian)測器(qi),原(yuan)理是利(li)用(yong)(yong)光(guang)散射效應(ying)(ying),可(ke)(ke)檢(jian)(jian)測揮(hui)發(fa)性低于流(liu)動相的(de)任何樣品(pin),通過霧化(hua)(hua)器(qi)去除(chu)溶劑,讓化(hua)(hua)合(he)物(wu)形(xing)成(cheng)懸浮顆粒,從(cong)而(er)形(xing)成(cheng)散射效應(ying)(ying)。ELSD靈敏度比RID高(gao),對溫度變化(hua)(hua)不敏感,基(ji)線穩定,可(ke)(ke)用(yong)(yong)于梯度洗脫,并且可(ke)(ke)在(zai)沒(mei)有標(biao)準(zhun)品(pin)和化(hua)(hua)合(he)物(wu)結構參數未知的(de)情況下檢(jian)(jian)測未知化(hua)(hua)合(he)物(wu),但不能(neng)使用(yong)(yong)不揮(hui)發(fa)的(de)鹽(yan)類(lei)溶劑,而(er)要用(yong)(yong)醋酸銨(an)之類(lei)的(de)揮(hui)發(fa)性緩沖鹽(yan)來代替。現在(zai)ELSD已被(bei)廣泛應(ying)(ying)用(yong)(yong)于碳水化(hua)(hua)合(he)物(wu)、類(lei)脂、脂肪酸和氨(an)基(ji)酸、藥物(wu)以及(ji)聚合(he)物(wu)等的(de)檢(jian)(jian)測。

  化學發(fa)光檢測器(CD)

  化學發(fa)(fa)(fa)(fa)光(guang)(guang)檢(jian)(jian)測器(qi)是(shi)近年來發(fa)(fa)(fa)(fa)展起(qi)來的(de)(de)一(yi)種快速、靈敏的(de)(de)新型檢(jian)(jian)測器(qi),因其設備簡單、價廉、線性范圍(wei)寬等(deng)優(you)點(dian)。其原理(li)是(shi)基(ji)于(yu)某些物(wu)(wu)質(zhi)在常(chang)溫下(xia)進(jin)(jin)行化學反(fan)(fan)應(ying),生(sheng)成(cheng)處于(yu)激發(fa)(fa)(fa)(fa)態(tai)(tai)(tai)勢反(fan)(fan)應(ying)中間(jian)體或(huo)反(fan)(fan)應(ying)產物(wu)(wu),當它們(men)從激發(fa)(fa)(fa)(fa)態(tai)(tai)(tai)返回(hui)基(ji)態(tai)(tai)(tai)時(shi),就(jiu)發(fa)(fa)(fa)(fa)射出(chu)(chu)光(guang)(guang)子(zi)。由于(yu)物(wu)(wu)質(zhi)激發(fa)(fa)(fa)(fa)態(tai)(tai)(tai)的(de)(de)能量(liang)是(shi)來自(zi)化學反(fan)(fan)應(ying),故叫作(zuo)化學發(fa)(fa)(fa)(fa)光(guang)(guang)。當分離組分從色譜柱中洗脫出(chu)(chu)來后,立(li)即(ji)與(yu)適(shi)當的(de)(de)化學發(fa)(fa)(fa)(fa)光(guang)(guang)試劑混(hun)合,引起(qi)化學反(fan)(fan)應(ying),導致發(fa)(fa)(fa)(fa)光(guang)(guang)物(wu)(wu)質(zhi)產生(sheng)輻(fu)射,其光(guang)(guang)強度(du)與(yu)該物(wu)(wu)質(zhi)的(de)(de)濃度(du)成(cheng)正比。該檢(jian)(jian)測器(qi)不需要光(guang)(guang)源,也不需要復(fu)雜(za)的(de)(de)光(guang)(guang)學系統,只要有(you)恒流泵,將(jiang)(jiang)化學發(fa)(fa)(fa)(fa)光(guang)(guang)試劑以一(yi)定的(de)(de)流速泵入混(hun)合器(qi)中,使之與(yu)柱流出(chu)(chu)物(wu)(wu)迅速而又均勻地混(hun)合產生(sheng)化學發(fa)(fa)(fa)(fa)光(guang)(guang),通過光(guang)(guang)電倍增管將(jiang)(jiang)光(guang)(guang)信(xin)號(hao)變(bian)成(cheng)電信(xin)號(hao),就(jiu)可進(jin)(jin)行檢(jian)(jian)測。這種檢(jian)(jian)測器(qi)的(de)(de)最小檢(jian)(jian)出(chu)(chu)量(liang)可10-12g。

  質譜(pu)檢測器(qi)(MSD)

  也是一種通(tong)用(yong)型(xing)檢(jian)(jian)測器(qi),在靈敏度(du)、選擇(ze)性(xing)、通(tong)用(yong)性(xing)及化合物(wu)的(de)(de)分子量(liang)和(he)結(jie)構信息的(de)(de)提供等(deng)方面都有突(tu)出的(de)(de)優點(dian)。但它的(de)(de)昂貴操作費用(yong)和(he)復雜性(xing)在一定(ding)程度(du)上限制了它的(de)(de)推廣應用(yong)。理(li)解了這些檢(jian)(jian)測器(qi)的(de)(de)原(yuan)理(li)可(ke)以幫助我們在實驗中更好地選擇(ze)和(he)使用(yong)檢(jian)(jian)測器(qi),更高效率地完成(cheng)檢(jian)(jian)測任務。

以上就是小編(bian)為大家(jia)帶來的解析,看(kan)完這篇文章大家(jia)是不是對液相色(se)譜儀又有了進一(yi)步的了解?


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